化學(xué)品細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)方法有哪些
化學(xué)品細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn),?也被稱為Ames試驗(yàn),是一種用來(lái)檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)是否具有致突變性(即引起基因突變的能力)的生物學(xué)檢測(cè)方法??。該試驗(yàn)由美國(guó)科學(xué)家布魯斯·艾姆斯(BruceAmes)在1970年代開(kāi)發(fā),并已被廣泛應(yīng)用于評(píng)估新化學(xué)物質(zhì)(如藥物、食品添加劑、農(nóng)藥、化妝品成分等)的致突變潛力?。
細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)原理是利用了特定類型的突變菌株,這些菌株攜帶有特定的基因突變,導(dǎo)致它們不能在沒(méi)有外源性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。當(dāng)將這些菌株暴露于測(cè)試化合物中時(shí),如果該化合物具有致突變性,它會(huì)誘導(dǎo)這些突變菌株產(chǎn)生基因回復(fù)突變,使其重新獲得在無(wú)外源性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的能力。因此,通過(guò)檢測(cè)這些回復(fù)突變菌株的生長(zhǎng)情況,可以評(píng)估化合物的致突變性?。
化學(xué)品細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)方法
?平板摻入法?:將主平板或冷凍保存的菌株培養(yǎng)物接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基內(nèi),培養(yǎng)后將融化好的頂層培養(yǎng)基分裝于無(wú)菌小試管中,加入測(cè)試菌株新鮮菌液、試驗(yàn)樣品浸提液(或陰性、陽(yáng)性對(duì)照液)以及代謝活化系統(tǒng)(如S9混合物),混勻后傾倒在底層培養(yǎng)基上,培養(yǎng)后觀察結(jié)果?。
?預(yù)保溫法?:在加入頂層培養(yǎng)基前,先將受試物和菌液在適宜溫度下預(yù)培養(yǎng)一段時(shí)間,再進(jìn)行平板摻入操作?。
?波動(dòng)法?:通過(guò)改變培養(yǎng)條件或處理方式來(lái)觀察基因突變的發(fā)生情況?。
?點(diǎn)試法?:將測(cè)試菌液和受試物點(diǎn)在無(wú)菌濾紙片上,培養(yǎng)后觀察結(jié)果?。
細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)應(yīng)用范圍及對(duì)象
細(xì)菌回復(fù)突變測(cè)試廣泛適用于不同類型的化學(xué)品,可以涵蓋工業(yè)化學(xué)品、農(nóng)藥、藥物、食品添加劑等多個(gè)領(lǐng)域。
在細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)中,通常選擇特定的細(xì)菌株作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,如沙門(mén)氏菌、大腸桿菌等。這些細(xì)菌株常具有某種突變表型(如缺陷酶活性),當(dāng)暴露于測(cè)試化學(xué)物質(zhì)后,只有那些發(fā)生了突變并恢復(fù)了正常表型的細(xì)胞才能生存下來(lái),并形成可觀察到的小落點(diǎn)。
通過(guò)統(tǒng)計(jì)這些小落點(diǎn)的數(shù)量和頻率,可以評(píng)估化學(xué)物質(zhì)是否引起了細(xì)菌的基因突變。該試驗(yàn)被廣泛應(yīng)用于預(yù)測(cè)化學(xué)物質(zhì)對(duì)環(huán)境和人類健康的潛在危害,并為毒性評(píng)估提供重要參考數(shù)據(jù)。
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