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　　在加入或不加入代謝活化系統(tǒng)的條件下，使培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞暴露于受試樣品中。用中期分裂象阻斷劑（如秋水仙素）處理，使細(xì)胞停止在中期分裂象，隨后收獲細(xì)胞、制片、染色、分析染色體畸變。通過檢測受試樣品誘發(fā)體外培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞染色體畸變的能力，從而評價(jià)受試樣品的致突變性及其強(qiáng)度。中科檢測可以開展體外哺乳動物細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)。

　　體外哺乳動物細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)方法

　　⒈細(xì)胞培養(yǎng)與染毒。試驗(yàn)需在加入和不加入S9的條件下進(jìn)行。試驗(yàn)前一天，將一定數(shù)量的細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿（瓶）中，放C02培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。試驗(yàn)時(shí)吸去培養(yǎng)皿（瓶）中的培養(yǎng)液，加入一定濃度的受試樣品、S9混合液（不加s9混合液時(shí)，需用培養(yǎng)液補(bǔ)足）以及一定量不含血清的培養(yǎng)液，放培養(yǎng)箱中，根據(jù)細(xì)胞周期決定處理2～6小時(shí)。

　　結(jié)束后，吸去含受試樣品的培養(yǎng)液，用Hanks液洗細(xì)胞3次，加入含10％胎牛血清的培養(yǎng)液，放回培養(yǎng)箱，于24小時(shí)內(nèi)收獲細(xì)胞。于收獲前2～4小時(shí)，加入細(xì)胞分裂中期阻斷劑（如用秋水仙素，作用時(shí)間為4小時(shí)，終濃度為1ug/ml)。

　　⒉用0.25％胰蛋白酶溶液消化細(xì)胞，待細(xì)胞脫落后，加入含10％胎牛或小牛血清的培養(yǎng)液終止胰蛋白酶的作用，混勻，放入離心管以1000～1200r/min的速度離心5～7分鐘，棄去上清液。

　?、臣尤?.075mol/LKCl溶液7ml，用滴管將細(xì)胞輕輕地混勻，放入37℃水浴中低滲處理7分鐘，加入2ml固定液（甲醇：冰醋酸3：1)混勻，以1500r/min速度離心5～7分鐘，棄去上清液。

　?、醇尤?ml固定液，混勻后固定7分鐘，以1500r/min速度離心7分鐘，棄去上清液。用同法再固定1～2次，棄去上清液。

　?、导尤霐?shù)滴新鮮固定液，混勻。用混懸液滴片，自然干燥。用吉姆薩染液染色。

　?、哆x擇100個(gè)分散良好的中期分裂象，在顯微鏡油鏡下進(jìn)行讀片。在讀片時(shí)應(yīng)記錄每一觀察細(xì)胞的染色體數(shù)目，對于畸變細(xì)胞還應(yīng)記錄顯微鏡視標(biāo)位置及畸變類型。所有處理組、陽性和陰性對照組均需測定有絲分裂指數(shù)。每一劑量組應(yīng)分析不少于500個(gè)分散良好的中期分裂象。

　　體外哺乳動物細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)

　　《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015年版)第六章9體外哺乳動物細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)

　　《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015年版)第六章11哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)

　　消毒劑安全性毒理學(xué)評價(jià)程序和方法GB/T38496-2020（6.8.3）

　　消毒技術(shù)規(guī)范（衛(wèi)生部2002年版）（2.3.8.3）

　　消毒劑安全性毒理學(xué)評價(jià)程序和方法GB/T38496-2020（6.8.5）

　　消毒技術(shù)規(guī)范（衛(wèi)生部2002年版）（2.3.8.5）

　　食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)GB15193.6-2014